Многие мембранные ферменты представляют собой комплексы, состоящие из нескольких субъединиц. В качестве примера можно привести Н + - АТРазу, Na +/ К + - АТРазу, митохондриальные комплексы электронного транспорта и фотосинтетические реакционные центры. Некоторые интегральные мембранные белки прочно связаны с растворимыми белками с помощью нековалентных взаимодействий (примерами могут служить Fo - и F1-компоненты митохондриальной Н + - АТРазы). В Е. сoli Fo-компонент, содержащий по данным электрофореза в ПААГ-ДСН три типа субъединиц (а, b, с), образует протонный канал, a F1, состоящий из пяти типов субъединиц, содержит активный центр, участвующий в гидролизе АТР. Для таких белков очень важно определить характер субъединиц, стехиометрию комплекса и ближайшие взаимодействия его компонентов. Это весьма непростая задача даже тогда, когда белковый комплекс уже изолирован. Возникающие здесь проблемы по существу не отличаются от таковых для растворимых белковых комплексов, но имеются и свои дополнительные сложности.

Прежде всего следует иметь в виду, что взаимодействие между субъединицами очень сильно зависит от типа липидов и детергентов, с которыми связаны белки.

Еще одна проблема связана с тем, что в бислое мембранные белки могут образовывать комплексы из-за высокой их локальной концентрации. При солюбилизации же независимо от используемого детергента может произойти разбавление мембранных белков и их разъединение. По закону действующих масс это приведет к диссоциации комплексов, в которых взаимодействие между компонентами не очень сильное.

Для изучения стехиометрии субъединиц и их ассоциации в очищенном комплексе используется всего несколько методов:

1) химическое сшивание;

2) количественный анализ N-концевых аминокислот;

3) определение отношения массы субъединиц в ДСН-полиакриламидных гелях путем определения интенсивности окрашивания, с помощью радиоавтографии или иммуноблоттинга.

Каждый метод имеет свои ограничения, но все они использовались на практике.

Похожие материалы:

Характеристика отрасли
Производство минеральных удобрений является крупнейшей подотраслью химической промышленности. Это одна из наиболее прибыльных и финансово-устойчивых отраслей не только в химическом комплексе, но и в промышленности в целом. Продукция росси ...

Подрод Paphiopedilum
Эта большая и крайне неоднородная группа включает в себя 60 видов, разделенных на 5 секций. Секция Coryopedilum включает 9 видов, 5 из которых являются эндемиками о. Борнео. Все виды многоцветковые, с однотонными зелеными листьями. Цветы ...

Часто задаваемые вопросы: Болезни каттлей. Пятно на росте
Подскажите, что это у моей каттлеи. Появилось за сутки на молодом росте пятно черное сухое, но не насквозь. Это молодой рост см 20. Насколько я знаю гниль мокрая, а это сухая. Вчера вечером перед помывкой окна я их все очень внимательно о ...