Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов
Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.
Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.
1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.
2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.
Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.
Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.
Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.
Похожие материалы:
Фрагмент урока № 4
Тема: Тип Членистоногие. Класс Ракообразные
Цель урока: рассмотреть особенности строения ракообразных.
Задачи урока: выявить характерные черты строения и жизнедеятельности ракообразных;
продолжить формирование умений сравнивать разные ...
Жизненные циклы развития. Онтогенез и его
периодизация: предэмбриональный, эмбриональный, постэмбриональный периоды.
Прямое и непрямое развитие
Индивидуальное развитие организма, или онтогенез, - это совокупность последовательных морфологических, физиологических и биохимических преобразований, претерпеваемых организмом от момента его зарождения до смерти. В онтогенезе происходит ...
Медицинские исследования
ВОЗ создала в 1996 году международный проект по ЭМП для оценки существующих научных фактов наличие возможного влияния электромагнитных полей на здоровье человека, включая радиочастотные поля, испускаемые мобильными телефонами и их базовым ...