Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.

Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.

1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.

2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.

Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.

Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.

Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.

Похожие материалы:

Оценка влияния П-56 и S-100кр. на выживаемость галлицы Aphidoletes aphidimyza Rond. на стадии образования куколки
При обработке хранившихся коконов выживаемость в варианте с препаратом П-56-1 ниже, чем в контроле (табл. 6). Однако различие между ними не существенно при 5%-ном и 0,01% -ном уровне значимости. В варианте с препаратом S-100кр. наблюдает ...

Фрагмент урока № 5
Тема: Тип Членистоногие. Класс Насекомые. Цель урока: изучить особенности внешнего строения насекомых. Задачи урока: - рассмотреть особенности внешнего строения майского жука продолжить формирование умений выполнять лабораторные работы ...

Коричневые пятна на молодых ростах
Молодые листочки сеянца каттлеи вылезают вот с такой коричневой расцветкой. На прежних листах такого нет. Заболевание, или природа? Первый листик такой я мазал фундазолом, но по сравнению с последующими изменений в нем никаких нет. Ответ ...