Определение молекулярной массы нативного белка с помощью гидродинамических методов
Применение этих методов для мембранных белков может быть сопряжено с большими трудностями, вызванными связыванием детергента.
Для нахождения молекулярной массы белка используют два метода.
1. Прямо измеряют количество связанного детергента на 1 г белка. Для этого используют спектральные методы или радиоактивно меченный детергент, а для выделения комплексов применяют различные методы, например гель-фильтрацию. Установив относительное содержание белка и детергента в комплексе, cреднее значение парциального удельного объема получают как средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента. После этого без труда находят Mк, а поскольку соотношение между белком и детергентом в комплексе известно, находят молекулярную массу белка.
2. Измеряют S0 (коэффициент седиментации) в средах с разными значениями плотности раствора ρ. Такие среды обычно получают, используя смеси Н2О и D2O. Из графика зависимости S0 от ρ находят как Mк, так и Vк (ср). При этом предполагается, что Vк - это средневзвешенное соответствующих величин для чистого белка и чистого детергента.
Vк(ср) = (Доля белка) • V(ср) белок + (Доля детергента) • V(ср) детергент.
Оценив V(ср) белок и взяв V(ср) детергент из таблицы, получают молекулярную массу белковой составляющей Mк.
Для построения графика зависимости S0 от ρ проводят аналитическое центрифугирование. Можно проводить центрифугирование и в градиенте плотности сахарозы, используя смеси Н2О и D2O, но анализ результатов в этом случае гораздо сложнее, хотя принципиально не отличается от предыдущего случая.
Похожие материалы:
Ингибиторы ферментов синтеза дезоксирибонуклеотидов и использование
их для лечения злокачественных новообразований
Препараты этой группы являются антагонистами естественных метаболитов. При наличии опухолевых заболеваний используют в основном следующие вещества (см. структуры).
Антагонисты фолиевой кислоты: Метотрексат (аметоптерин).
Антагонисты пур ...
Осмотическое давление крови
Это давление, обусловленное растворенными в жидкой части крови осмотически активными веществами (ионами, белками). Оно определяет транспорт воды из внеклеточной среды организма в клетки и наоборот.
В клинической и научной практике широко ...
Охрана редких видов семейства Зонтичных в Пензенской области
Мной были проанализированы редкие виды семейства Зонтичных с точки зрения их охраны на территории Пензенской области.
Наиболее редкими для области из семейства Зонтичных являются 3 вида, получившие статус 1 (Е) - вид находящийся под угро ...