Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия - это обычная методика, но в случае интегральных мембранных белков при ее применении возникают особые проблемы. В этом методе додецилсульфат связывается с полипептидными цепями, и комплексы белок-ДНС разделяются в полиакриламидном геле в соответствии с их стоксовыми радиусами, которые в большинстве случаев зависят от молекулярной массы. Молекулярную массу определяют, сравнивая электрофоретическую подвижность данного комплекса и известного стандарта. Однако связывание ДСН с неизвестным белком может качественно отличаться от связывания со стандартами, и тогда будет получен неправильный результат. Подобная ситуация наблюдается для интегральных мембранных белков с высоким содержанием неполярных аминокислотных остатков. Возможна и другая ситуация. Связывающийся с ДСН мембранный белок может находиться в не полностью развернутом состоянии, что тоже приведет к аномальному повышению электрофоретической подвижности из-за образования более компактного комплекса белок-ДСН. Все эти эффекты весьма существенны. Например, лактозопермеаза имеет кажущуюся молекулярную массу 33 000, если измерять ее с помощью электрофореза в ПААГ в присутствии ДСН; в действительности же, как показывают результаты генетического анализа, ее молекулярная масса равна 46 000. Еще одна проблема - возможное наличие четвертичной структуры. Некоторые мембранные белки агрегируют даже в присутствии ДСН. Например, гликофорин А или белок оболочки бактериофага М13 (или fd) при электрофорезе в полиакриламидных гелях с ДСН находятся в основном в виде димеров.

Итак, оценка молекулярной массы субъединиц сильно неполярных интегральных мембранных белков, определенная с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН, может оказаться неверной. К несчастью, простая альтернатива этому методу отсутствует, и правильную величину часто получают либо по данным о полной первичной последовательности (обычно последовательности соответствующего гена), либо с помощью точного гидродинамического анализа.

Похожие материалы:

Кистепёрые рыбы. Латимерия.
В 1938 г. у берегов Южной Африки была поймана неизвестная рыба, которую зоолог Дж. Л.Б. Смит и назвал латимерией (в честь хранительницы музея Куртенэ-Латимер, обнаружившей рыбу в улове тральщика). Оказалось, что латимерии живут у Коморски ...

Средства индивидуальной защиты
При химическом и бактериологическом заражении местности, к средствам индивидуальной защиты относятся: средства индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор Р-2, противогаз ГП-5, противопыльная тканевая маска ПТМ – 1, ватно – марлевая ...

Жизненные циклы однолистных каттлей
На основе статей Чадвика Есть два крайних примера - C. mendeli и C. lueddemanniana Мендели цветет в середине апреля - мае (то есть рано). Потом дает новый рост, который к концу сезона дает чехол, с ним зимует и цветет, как уже говорилос ...